在自動低壓液相色譜方法開發(fā)過程中，采用等度洗脫時，先洗脫組分的色譜峰峰寬較窄，后洗脫組分的色譜峰峰寬較寬；而梯度洗脫方式，則具有分析時間短(特別是對于樣品組分復(fù)雜的情況來說)，在梯度范圍內(nèi)各色譜峰的峰寬近乎一致等特點(diǎn)。
在化學(xué)發(fā)展中,化合物性能與結(jié)構(gòu)的確定有著重要的歷史地位,尤其是有機(jī)、高分子化合物結(jié)構(gòu)的確定更是影響著化學(xué)發(fā)展的進(jìn)程,所以說,液相色譜也有著同樣重要的歷史意義。液相色譜的出現(xiàn)、發(fā)展和過程直接影響著有機(jī)、高分子化合物的分離和分析,從而推動了化學(xué)學(xué)科的發(fā)展。
自動低壓液相色譜由輸出泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱 、梯度沖洗裝置、檢測器及數(shù)據(jù)處理和微機(jī)控制單元組成。輸出泵的功能是將沖洗劑在高壓下連續(xù)不斷地送入柱系統(tǒng)，使混合物試樣在色譜中完成分離過程。常用的進(jìn)樣方式有3種：注射器隔膜進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動進(jìn)樣器進(jìn)樣。自動低壓液相色譜的功能是將混合物中各組分分離。梯度沖洗又稱溶劑程序，通過連續(xù)改變沖洗劑的組成，改善復(fù)雜樣品的分離度，縮短分析周期和改善峰形，其功能類似于氣相色譜中的程序升溫。檢測器的功能是將從色譜柱中流出的已經(jīng)分離的組分顯示出來或轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號，自動低壓液相色譜主要有紫外吸收檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器和折光示差檢測器，其中以紫外吸收檢測器使用zui廣。現(xiàn)代化的儀器都配有計(jì)算機(jī)，以實(shí)現(xiàn)自動處理數(shù)據(jù)、繪圖和打印分析報告。
基質(zhì)或者樣品組分比較復(fù)雜時，自動低壓液相色譜zui常用的操作模式，而主要在梯度洗脫中出現(xiàn)的鬼峰是特別讓人頭疼的。有可能由于來源排查不清以及解決方案不到位而導(dǎo)致原來的方法在實(shí)際的應(yīng)用與轉(zhuǎn)移過程中出現(xiàn)問題，甚至面臨重新開發(fā)方法的尷尬境地。鬼峰意即來源不清，不可指認(rèn)，時有時無，對目標(biāo)峰或者樣品純度測試產(chǎn)生干擾作用的峰，即為典型的鬼峰，一般來講，鬼峰的出現(xiàn)與色譜柱無關(guān)(當(dāng)然，梯度洗脫時，梯度設(shè)置不合適的情況除外)。
自動低壓液相色譜對于含量或者純度檢測方法而言，在主峰位置或附近出現(xiàn)鬼峰的話，影響到方法的專屬性以及檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。特別地，對于藥物制劑或者API的純度測試來說，自動低壓液相色譜要求對降解產(chǎn)生的雜質(zhì)之外的雜質(zhì)來源做出較詳細(xì)的說明(如反應(yīng)副產(chǎn)物或者反應(yīng)原料帶入等)。鬼峰的出現(xiàn)，可能增加此項(xiàng)工作的難度與工作量。
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